Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Содержание

Подсчитывание с помощью счетчиков

Применяются разные методики подсчета тромбоцитов. Сейчас подсчитывание в мазке крови ведется несколькими способами:

  • Подсчитывание по методике Фонио;
  • Вычисление количества тромбоцитов камерой с использованием методики Горяева;
  • Подсчитывание с помощью автоматических электронных счетчиков;
  • С использованием люминесцентного микроскопа.

Болезнь, при которой увеличивается количество клеток, называется тромбоцитоз. При снижении – в крови возникает тромбоцитопения.

Подсчитывание числа тромбоцитов по Фонио

Исследование по методике Фонио применяется наиболее часто. Оно базируется на определении количества пластинок в окрашенных мазках крови с использованием химреактивов:

  • сульфат магния 14%;
  • этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) натрия 6%.

Ход исследования

Сульфат магния или ЭДТА при помощи капилляра Панченкова помещают в стеклянную пробирку, туда же помещают капиллярную кровь, которую берут, используя тот же капилляр.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Кровь с реактивом перемешивают, а затем из полученного раствора готовят материал для определения.

Для этого на предметное стекло наносятся тонкие мазки, они фиксируются и окрашиваются:

  • с применением магния сульфата – 2-3 часа;
  • с использованием ЭДТА –минут.

После высыхания мазки разглядывают под микроскопом, у которого имеется иммерсионный объектив для увеличения изображения и усиления яркости.

Кровяные пластинки должны располагаться по отдельности, чтобы этого добиться используется самое тонкое место мазка.

Для подсчета мазок передвигается под объективом микроскопа, чтобы были подсчитаны 1000 эритроцитов. Затем считают находящиеся среди них кровяные пластинки.

При известном количестве эритроцитов в одном литре крови, можно произвести подсчет абсолютного числа тромбоцитов.

По методу Горяева тромбоцитарные пластинки считает камера с применением цитратного вещества. Число клеток определяют в 1 МК/л или в литре крови.

Химреактив №1:

  • гидрохлорид кокаина 3 г;
  • хлорид натрия 0,25 г;
  • фурацилин 0,25 г;
  • вода 100 мл.

Химреактив №2:

  • 1% раствор оксалата аммония. Раствор надо прокипятить, профильтровать и после этого он хранится на холоде. При помощи этого реактива растворение эритроцитов происходит быстрее.

Ход исследования

Используют материал, взятый из вены в пробирку с цитратом. Этим веществом служит ЭДТА. При взятии из пальца тромбоциты могут давать сгустки.

Нужно взять 4 мл химреактива №1 или №2, добавить 0,02 мл крови, получится разведение в 200 раз. Кровь с реактивом слегка взбалтывают, оставляют на полчаса, за это время происходит лизис.

В подготовленную камеру помещают материал из подготовленной крови, а затем опускают во влажную чашку Петри на 5 минут для оседания тромбоцитарных клеток.

В камере клетки хорошо видны, благодаря тому, что используется фазово-контрастные линзы объектива.

Частицы пыли и грязи должны быть хорошо вымыты, чтобы не оставлять след на стеклянной таре и самой камере, иначе их при подсчете можно принять за тромбоциты.

Счетчик называется автоматический гематологический аппарат. С его помощью можно определить количество кровяных пластинок, также сделать гистограмму (распространение по величине).

Аппаратное исследование достаточно точное, делается экспресс-методом, который выдает результаты в течение 1 минуты.

При помощи аппаратного гематологического счетчика можно также построить график расположения клеток по размеру.

Методика люминесцентной микроскопии с помощи лампы считается устаревшим. Для определения тромбоцитов получил меньшее распространение и сейчас почти не используется.

Для обзора и подсчитывания клеток крови используют различные методы микроскопического исследования, а также гематологические электронные счетчики.

Внедрение новых технологий для изучения состава клеток позволит исключить ошибки лаборантов и добиться более высокой точности и качества диагностики.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

К увеличению тромбоцитов причастны многие факторы. Так, все острые инфекции в организме неизбежно ведут к повышению количества этих форменных элементов крови. То же происходит и при нарушениях системы кроветворения, онкологических патологиях.

Если человек часто переживает стресс, это тоже влияет на количество тромбоцитов в крови. Некоторым может показаться странным то, что при кровопотерях число таких форменных элементов растет. Но так человеческий организм пытается компенсировать потери крови.

Повышенные тромбоциты бывают и у лиц, длительно употребляющих алкоголь.

Если же человек длительно и бесконтрольно принимает препараты, обладающие тромбоцитопеническими свойствами, то в итоге картина его крови существенно изменяется. Это же бывает и при поражении многих органов, в частности, щитовидной железы, печени и др. Иногда кровотечение из носа или порез может отрицательно сказаться на количестве тромбоцитов и снизить их количество.

  • Капилляром Панченкова набирают 14% раствор сернокислого магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в количестве 25 мкл (до метки «75») и вносят в пробирку;
  • кровь из пальца набирают полный капилляр (до метки «0») и выливают всю кровь в пробирку;
  • содержимое пробирки тщательно перемешивают и из смеси готовят мазок, который фиксируют и окрашивают по Романовскому — Гимза. Если в качестве стабилизатора был взят раствор сернокислого магния, то продолжительность окраски составляет 2–3 часа, а при использовании раствора ЭДТА — 30–45 минут;
  • наносят на край мазка — в тонкой его части — иммерсионное масло;
  • считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов; при подсчете, чтобы не сбиться, рекомендуется прибегать к ограничению поля зрения путем применения окуляров, поле зрения которых разделено сеткой.

Зная количество эритроцитов в 1 мкл крови и число тромбоцитов на 1000 эритроцитов, вычисляют количество тромбоцитов в 1 мкл крови.

где Э — число эритроцитов в 1 мкл.

  • В пробирку наливают 4 мл раствора, приготовленного по сложной прописи (3 г кокаина солянокислого, 0,25 г хлористого натрия, 0,025 г фурацилина, 100 мл дистиллированной воды)* или 4 мл 1% раствора оксалата аммония;

* На практике в клинических лабораториях, ввиду принадлежности кокаина к наркотическим веществам, используют пропись следующего состава: новокаина гидрохлорида 3,5 г; натрия хлорида 0,25 г; воды дистиллированной до 100 мл. Время гемолиза эритроцитов составляет около 60 мин.

  • капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови, осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают и оставляют на 25–30 минут для гемолиза эритроцитов;
  • после повторного перемешивания заполняют камеру Горяева, которую помещают во влажную камеру;
  • через 5 минут производят подсчет количества тромбоцитов в 25 больших квадратах с использованием фазово-контрастного устройства.

где а — количество тромбоцитов в 400 малых квадратах;П — степень разведения (200).

Описание подсчета тромбоцитов по Фонио начинается со взятия крови из капилляра пальца. Биологическую жидкость помещают в капилляр. Образец отправляют в лабораторию для фиксации содержимого.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Важно! Первую каплю снимают ватой, в ней содержится максимальное количество форменных элементов крови. Если провести исследование по ней, будет поставлен ошибочный тромбоцитоз.

Для окрашивания применяют один из следующих реагентов:

  • раствор ЭДТА 2,6%;
  • раствор сульфата магния 14%.

В капилляр помещают 75 мкл выбранного химического вещества. Добавляют биологическую жидкость до максимальной отметки. Используемые жидкости должны перемешаться.

Из капилляра полученную жидкость добавляют на предметное стекло, размазывают пластиковым шпателем. Мазок окрашивают по правилам метода Романовского-Гимза.

Внимание! От того, какой реактив применяется в лаборатории зависит время фиксации клеток. Для ЭДТА оно составляет 40 минут, для сульфата магния — до 3 часов.

Полученный мазок помещают под микроскоп. Фокусируют изображение. Врач-лаборант подсчитывает количество эритроцитов и тромбоцитов до получения значения, равного 1000. Чтобы повторно не посчитать каждую клетку, микроскоп перемещается слева направо, вниз, справа налево. Движение осуществляют до конца мазка или подсчета итогового количества клеток.

Число эритроцитов и тромбоцитов перемножают, делят на 1 тысячу. С помощью данной формулы помучается значение кровяных пластинок на 1 л крови.

Норма кровяных пластинок разнится, в зависимости от возраста. Сразу после рождения показатель постоянно меняется, стабилизируется он к 3 годам. Количество показателя у женщины меняется в зависимости от фазы менструального цикла. Во время маточного кровотечения число тромбоцитов резко снижается для того, чтобы кровь беспрепятственно выходила наружу.

У беременных женщин показатель снижен, это необходимо для нормального развития плаценты и снижения риска тромбоза.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Для мужчин характерно установление показателя примерно на одном уровне, он редко колеблется. Это происходит из-за того, что у мужчин постоянно обновляется кровь, отсутствует кровотечение.

Таблица нормального показателя для детей.

Возраст

Количество кровяных пластинок, тыс/мкл

Дети после рождения и до 3 месяцев

120-450

Дети от 3 месяцев и до 1 года

100-360

Дети от 1 до 5 лет

150-350

От 6 до 15 лет

180-400

От 16 до 20 лет

180-450

Таблица нормальных значений показателя у взрослых, в зависимости от пола.

Пол

Количество показателя, тыс/мкл

Мужчины

180-380

Женщина

140-380

Беременная женщина

140-320

Ход исследования

Определение числа тромбоцитов — важнейший метод исследования, способный обнаружить наиболее частое нарушение гемостатического потенциала крови — тромбоцитопению. В настоящее время для определения числа тромбоцитов имеется несколько лабораторных технологий (автоматизированный, по Фонио и др.). Наибольшую точность имеет микроскопический метод при подсчете в камере, однако этот метод требует от врача-лаборанта опыта, напряжения зрения, концентрации внимания.

Ход исследования

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Предметные стекла простые и шлифованные.
  2. Смесители для эритроцитов.
  3. Камеры Горяева.
  4. Микроскопы.
  5. Микроскоп с фазовоконтрастным устройством.
  6. Черная бумага.
  7. Ножницы.
  8. Осветитель для микроскопа.
  9. Сернокислый магний (MgS04).
  10. Кокаин.
  11. Хлористый натрий.
  12. Лимоннокислый натрий.
  13. Дистиллированная вода.
  14. Метиловый спирт или смесь Никифорова (смесь равных частей 96° этилового спирта и эфира).
  15. Основной раствор краски Романовского.
  16. Иммерсионное масло.
  17. Набор инструментов для укола в палец.

Суть метода Фонио для подсчета тромбоцитов

Ход исследования

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Тромбоциты по Фонио – эффективный метод исследования, который помогает установить любые отклонения от нормы. Проводится расчет по специальной схеме, в том числе и процедура.

Тромбоциты – кровяные тельца, которые принимают участие в свертывании крови. Чтобы подсчитать точное количество этих элементов необходимо воспользоваться одним из современных исследований, например, методом Фонио. Тромбоциты по Фонио подсчитываются с повышенной точностью, поэтому исследование является самым комфортным непосредственно при использовании автоматического подсчета.

Для определения тромбоцитов по методу Фонио необходимо использовать такие реактивы, как:

  1. Сульфат магния раствор 14% (для приготовления средства рекомендуется использовать исключительно стерильный раствор).
  2. Краситель Романовского-Гимзы.
  3. Фиксаторы Лейшмана или Май-Грюнвальда.

Необходимо понимать, что даже незначительные отклонения от требований могут привести к приготовлению некачественного средства.

Перед тем как нанести препарат на кожные покровы, рекомендуется их предварительно обработать. Они должны быть сухими. Прокол делается небольшим. Затем на него необходимо нанести небольшую каплю раствора сульфата магния и осторожно смешать. Из того соединения, которое образовалось, делаются мазки для исследования. Их нужно высушить и окрасить по методу Паппенгейма.

Расчет производится на одну тысячу данных кровяных телец и тромбоцитов, которые попали в исследуемый высушенный мазок. Для получения абсолютного значения тромбоцитов рекомендуется воспользоваться установленной и везде принятой формулой расчета.

В данной ситуации всеми необходимыми подсчетами должен заниматься исключительно специалист.

Нормы концентрации

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Установленный уровень тромбоцитов в 1 куб. мм крови составляет от 120 до 400 тысяч.

Необходимо учитывать тот факт, что подсчет тромбоцитов по Фонио проводится с учетом возрастной категории пациента и это немаловажно:

  • Для детей в возрасте от года и пациентов старшей возрастной группы норма составляет от 180 до 320 тысяч.
  • Для новорожденных малышей норма – от 100 до 420 тысяч.
  • Норма для мужской части населения – от 180 до 400 тысяч. В данной ситуации стоит учитывать, что максимальная отметка может отмечаться у пациентов в возрасте от 42 лет, не ранее. Для пожилых норма должна не превышать отметки 320 тысяч.
  • У женской половины населения норма тромбоцитов должна быть в пределах от 180 до 34 тысяч. Максимальное значение отмечается у девочек в возрасте 16 лет, то есть в период полового созревания.

Если у пациентки месячные или она беременная, то нижние отметки нормы уменьшаются до 150 тысяч. Что касается уровня кровяных телец при менструации у девочек в подростковом периоде, то она снижается до отметки 75 тысяч. В период вынашивания ребенка показатели также уменьшаются, и это можно объяснить тем, что происходит увеличение объема крови, но также данное состояние отмечается и при неправильном питании. В такой ситуации проводится дополнительное обследование, корректируется питание.

Все пределы значений учитываются на 1 куб. мм.

Тромбоциты, норма которых свидетельствует о том, что в организме пациента отсутствуют какие-либо отклонения. Необходимо понимать — нарушения также будут сопровождаться не только уменьшением или увеличением показателей в исследованиях крови, но и соответствующей симптоматикой.

Поэтому при первых признаках заболевания стоит сразу обратиться к специалисту и пройти полное, качественное обследование. На основании полученных результатов обязательно назначается терапия.

Уменьшение уровня тромбоцитов может наблюдаться у пациента в такой ситуации, как:

  1. Лучевое поражение.
  2. Отравление организма вредными веществами и соединениями.
  3. Заболевания крови.
  4. Коллагеноз.
  5. Нефрит хронического типа.

Из-за низкого уровня тромбоцитов в крови у больного наблюдается плохая эластичность кровеносных сосудов, внутреннее кровотечение, возникают незначительные гематомы и точечные кровоподтеки.

  1. Длительный прием некоторых групп медикаментов.
  2. Хирургическое вмешательство.
  3. Удаление селезенки.
  4. Травмирование, которое сопровождается значительным кровотечением.
  5. Злокачественные новообразования.
  6. Анемия железодефицитная.

У пациента, который страдает от повышенного уровня тромбоцитов, возникает риск развития тромбоза. Также опасность возникает и в период вынашивания плода.

У пациентки могут возникнуть такие неприятные последствия, как:

  • токсикоз;
  • прерывание беременности;
  • задержка в развитии плода;
  • варикоз;
  • тромбоз ног;
  • тромбоэмболия;
  • инфаркт, который выступает последствием образования тромбов в сосудах.

У детей диагностируется два вида повышенного количества тромбоцитов:

  1. Первичный тип можно определить только в том случае, если у ребенка присутствуют какие-либо врожденные патологии крови.
  2. Вторичный тип развивается у маленьких пациентов из-за заболеваний, которые носят инфекционный характер. Также параллельно будет отмечаться повышение уровня и лейкоцитов.

В любой ситуации определить отклонения при подсчете поможет именно метод Фонио.

Один из самых распространенных методов лабораторного исследования состава крови – тромбоциты по Фонио.

Этот метод получил популярность благодаря тому, что полученный биоматериал можно исследовать не сразу, а в течение нескольких часов после забора, что для многих лабораторий является немаловажным фактором.

Анализ может дать небольшую погрешность, поэтому при необходимости его можно повторить через 3 – 5 дней.

Но к такому решению прибегают редко: как правило, если требуется высокая точность результатов, используются более дорогие и точные методы исследований.

Кровь любого человека состоит из плазмы (жидкой среды), в которой в свободном состоянии находятся несколько типов кровяных клеток: лейкоциты, тромбоциты и эритроциты.

Каждый тип кровяных клеток выполняет свою определенную функцию в организме, поэтому коагулограмму крови (лабораторное исследование на состав) часто используют для диагностики различных заболеваний и оценки общего здоровья организма.

Тромбоциты – это маленькие безъядерные клетки. Их часто называют красными кровяными тельцами из-за характерной окраски. Основная функция тромбоцитов – останавливать кровоток в месте нарушения целостности сосуда.

Именно тромбоциты закрывают место кровотечения, образовывая своего рода пробку. После перекрытия места повреждения тромбоциты ускоряют процесс свертывания плазмы и способствуют заживлению поврежденного участка.

Тромбоциты способны выделять специальные ферменты, которые способствуют ускорению процесса деления клеток, поэтому считаются незаменимым внутренним механизмом по стимуляции регенерации поврежденных тканей. Тромбоциты отвечают за регулировку проницаемости и эластичности сосудов.

Красные кровяные клетки живут совсем недолго, от 5 до 8 дней. В зависимости от стадии развития выделяют юные тромбоциты, зрелые и старые.

В небольших количествах в крови могут присутствовать так называемые «формы раздражения» и «дегенеративные формы», которые выделяются при появлении патологических процессов в организме. У здорового человека до 95 % красных кровяных клеток находятся в стадии зрелости.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Многие пациенты не знают, что это такое — подсчет тромбоцитов по указанному методу. Подсчет тромбоцитов по Фонио осуществляется на одну тысячу эритроцитов в мазках крови, окрашенных специальным красителем. Затем полученное количество пересчитывается в соотношении на 1 литр или 1 мкл.

Метод позволяет максимально точно узнать количество этих кровяных телец, что, в свою очередь, повышает точность диагноза.

Как делается анализ

Общее число этих клеток в определенном объеме крови называется коагулограммой. Кровь берется из пальца. Сдать ее для анализа надо каждому обследуемому человеку, ведь такой показатель способен помочь врачу определить многие опасные патологии.

При сдаче крови на тромбоциты необходимо учитывать следующее:

  1. Их показатель оказывается максимальным после физических перегрузок и приема еды. Вот почему сдача материала должна проводиться не ранее чем через восемь часов после последнего приема пищи.
  2. То же относится и к физической нагрузке: если анализ делается в состоянии возбуждения человека или обследуемый недавно занимался тяжелым физическим трудом, результаты могут быть неточными.
  3. Анализ берется утром.
  4. Чтобы точность анализа была максимальной, процедуру надо повторить еще два раза с перерывом в 3-5 суток.

Чтобы провести подсчет по методу Фонио, необходим 14%-й раствор магния сульфата и 2,6%-й раствор натрия этилендиаминтетраацетата. Реактивы берутся с помощью капилляра Панченкова.

  1. В пробирку вводится один из реактивов, в капилляре его должно быть до уровня «75». Туда же добавляется кровь, взятая тем же сосудом (ее должно быть до отметки «К».).
  2. Компоненты надо тщательно перемешать и приготовить тонкие мазки.
  3. Они окрашиваются по методу Романовского-Гимзе в течение двух-трех часов, если был взят сульфат магния, или на протяжении 35-45 минут, если был взят ЭДТА. В это время происходит окрашивание тромбоцитов. Они будут окрашены в фиолетово-розовый оттенок.

Как считаются тромбоциты? Для этого в поле зрения микроскопа производится подсчет эритроцитов и тромбоцитов до 1 тысячи красных кровяных телец. Количество тромбоцитов в крови можно узнать, умножив их число в мазке на количество эритроцитов в 1 мкл и разделив полученное произведение на 1000. Специфическая окраска клеток помогает врачу более точно подсчитать число анализируемых клеток.

Эта методика является самой распространенной на сегодняшний день. Главное отличие этого метода от других в том, что содержание форменных элементов учитывается в мазке (он является окрашенным).

Достоинства данного метода в следующем:

  • лаборант может хорошо видеть все клетки в мазке;
  • кровь обследуется в какое угодно время, без привязки к моменту получения образца крови;
  • формула подсчета количества клеток достаточно проста, кроме того, это количество зависит от тысячи красных кровяных телец в микролитре.

Метод Фонио

Наиболее распространенный метод подсчета тромбоцитов — метод Фонио (готовят мазок и красят его по Романовскому — Гимза; считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов).

Как делается анализ

Преимущества и недостатки

Сегодня существует много других, даже более технологичных, исследований. Однако в большинстве случаев врачи прибегают именно к методу Фонио, который имеет ряд существенных преимуществ.

Плюсы Описание
Точность и простота формулы вычисления на уровень содержания тромбоцитов Подсчет производится по количеству окрашенных эритроцитов в соотношении 1 тыс. эритроцитов на 1 мкл (или мл) крови.
Четкая видимость исследуемого материала Под микроскопом просматривается не только число элементов, но также форма, цвет или деструкции (агрегации) элементов.
Не требует срочных действий Лабораторные исследования можно провести в любое время (через несколько часов и даже суток после сдачи анализа).
Возможность повторной микроскопии Проводят для сравнения показателей или уточнения результатов.
Низкая себестоимость Не требует редких дорогостоящих компонентов.
Высокая скорость исследований Обычная лаборатория выдает результаты в течение 2 часов, с оборудованием последнего поколения — в течение 30 минут.

Единственным недостатком метода считается плохое качество мазка или неравномерность распределения кровяных клеток по лабораторному стеклу, в результате чего иногда отмечаются большие погрешности.

На достоверность результатов может повлиять и неграмотность или халатность лаборанта, а также оборудование для исследований низкого качества.

Подготовка к процедуре

Помимо этого, чтобы получить достоверные данные подсчета тромбоцитов по методу Фонио, пациенту необходимо соблюдать простые правила подготовки к сдаче крови:

  • В течение 3 дней необходимо воздержание от спиртного, жирного, жареного.
  • Сдавать кровь нужно натощак, с последнего приема пищи и жидкости должно пройти не менее 8 часов.
  • Накануне вечером необходимо отказаться от любых физических нагрузок.
  • На забор крови пациент приходит в утренние часы в строго установленное время.

При получении сомнительного результата анализ проводится 2-3 раза с интервалом не более 5 суток.

Исследование тромбоцитов по Фонио

Тромбоциты – уникальные безъядерные клетки, которые не только принимают активное участие в регенерации клеточных структур, а также препятствуют развитию обильного кровотечения, но и регулируют процессы проницаемости клеточных мембран. Их количество в крови может свидетельствовать о состоянии здоровья, а отклонения от нормы – первая причина развития патологических процессов сердечно-сосудистой системы.

Данные клетки синтезируются из плазмы мегакариоцитов – крупных клеток костного мозга. Продолжительность жизни не велика – всего 5-7 дней, после чего они утилизируются селезенкой и частично печенью. Тромбоцитам свойственно старение, от которого зависит качественный состав крови. Чтобы определить уровень содержания тромбоцитов в крови, используют лабораторный анализ Фонио, при котором исчисление производится наиболее точно. Особенности этого метода и способы вычислений разберем далее.

Такой способ лабораторного исследования предполагает забор крови из пальца, после чего ее смешивают с реактивами и рассматривают мазок под микроскопом. Определение числа тромбоцитов исчисляется по формуле, в эквиваленте отношения к эритроцитам, как наиболее тяжелым и объемным кровяным клеткам. То есть, каждый мазок рассматривают в перерасчете на 1000 эритроцитов. Такое соотношение позволяет более точно выявить наличие патологий синтеза тромбоцитарных клеток, а также снижает риски выявления псевдобтромбоцитоза.

Если рассматривать это соотношение более подробно, то вначале исчисляется общее количество эритроцитов в мазке, после чего показатель умножается на мл или мкл крови. Полученную величину сопоставляют с количественным составом тромбоцитов.

Суть метода основывается на взаимозависимости фракций крови. Иными словами, при повышенном содержании тромбоцитов, эритроцитов также будет больше. Прямая пропорциональность позволяет определять не только тромбоцитарный уровень в мазке крови, но и пересчитывать его на литры и микролитры.

Это удобно, поскольку нет необходимости брать много крови и обследовать ее всю, на что уйдет масса времени, сил лаборанта, а также реактивов, от чего стоимость анализа будет значительно выше, нежели имеется сейчас.

Для анализа тромбоцитарного уровня по Фонио обычно имеются показания, поэтому пациента заблаговременно подготавливают к забору крови. Предлагается отказаться от лекарственных препаратов, алкоголя, жирной и сладкой пищи, а также газированных напитков за 24 часа до проведения исследования.

Для анализа потребуются следующие реактивы:

  • раствор сульфата магния – выступает в качестве коагулянта;
  • краситель Романовского-Гимзы – возволяет разглядеть тромбоциты в общей массе крови, цвет которых измениться под воздействием красителя.

Кровь на анализ берут из безымянного пальца, который хорошо дезинфицируют спиртом или муравьиной кислотой.

После этого производится прокол скарификатором пучки. Первую появившуюся кровь снимают сухой ватой, поскольку она не пригодна для анализа. В появившуюся на поверхности пальца вторую каплю, вводят специальный раствор сульфата магния, после чего производят забор образованной субстанции специальным стеклянным периходником в пробирку. Палец пациента обрабатывается спиртом, дабы избежать инфицирования.

Из полученных образцов готовят мазки, нанося небольшое количество крови на предметное стекло, а также внося краситель, который поможет при подсчете фракций. Продолжительность окраски составляет от 35 минут до 2 часов, в зависимости от качества реактивов.

Ход определения

Итак, по истечении определенного времени (2-3 часа), предметные стекла помещают под микроскоп, где производиться подсчет тромбоцитов и эритроцитов.

Зрительно определить тромбоциты несложно. В зависимости от возраста, клетки могут окраситься в фиолетовый или розовый оттенок. Их границы четки, а в центре отмечается наличие специфических гранул. Форма округлая вытянутая, иногда с наличием ровных овалов.

На определенном фиксированном участке считают количество эритроцитов, а также, сколько на них приходиться тромбоцитов. Такая процедура производится до тех пор, пока не будет подсчитано ровно 1000 эритроцитов. Во внимание берут только близлежащие клетки, которые образуют группы. Единичные включения не несут никакой ценности и не составят биологической нагрузки при исследовании.

Предметное стекло перемещают под микроскопом до тех пор, пока не получиться нужная отметка. Для этого меняются поля зрения, что доступно современной технике. В некоторых клиниках данный подсчет производиться автоматически. Специальные микроскопы способны самостоятельно распознавать различные фракции крови, а также определять их соотношение в общей массе.

Получив необходимые показатели, уровень тромбоцитов рассчитывают по формуле:

  • х – искомый уровень тромбоцитов;
  • а – количество тромбоцитов в мазке на 1000 эритроцитов;
  • b – количество эритроцитов в 1 л крови;
  • 1000 – показатель содержания эритроцитов в мазке.

Чтобы было понятнее, как производиться расчет, разберем на примере. В ходе лабораторного исчисления было установлено, что количество тромбоцитов (указывается в промилле, поскольку величина относительная количеству эритроцитов) 75. На 1 мкл количество эритроцитов составляет 5х10, из чего следует, что количество тромбоцитов: 753,5х10/1000. В итоге получается, что в 1 мкл крови содержится 262х10, что считается нормой.

Лабораторное определение и подсчет тромбоцитов по Фонио имеет несколько преимуществ:

  1. Точность анализа – достигается за счет использования формулы расчета, компоненты которых легко можно подсчитать в капле крови.
  2. Быстрота проведения – от момента забора крови до получения результата может понадобиться не более 2 часов, а с использованием высокоточного оборудования процедура займет всегоминут.
  3. Не требуется дорогостоящих реактивов – достаточно ввести коагулянт, чтобы спровоцировать активность тромбоцитов, а также подкрасить мазок крови специальным раствором, который улучшит процесс распознания безъядерных клеток.

Главная особенность исследования заключается в получении наиболее точных результатов, нежели при развернутом анализе крови (коагулограмма).

Выделяют 3 основополагающих фактора, которые могут значительным образом повлиять на качество и результат анализа определения количества тромбоцитов по Фонио:

  1. Подготовка пациента к анализу – забор крови не производят в состоянии алкогольного опьянения (уровень тромбоцитов наряду с лейкоцитами увеличении в 3-4 раза), а также при сильной физической усталости и наличии продолжительного стресса со всеми вытекающими. Эти состояния могут провоцировать чрезмерную выработку тромбоцитов, которая является исключительно периодической и не несет в себе информацию о реальном положении вещей. Перед забором крови лучше ничего не есть, а также отказаться от приема любых лекарств. Оптимальное время для взятия образца – 7-9 часов утра.
  2. Качество реактивов – при использовании некачественных реактивов могут присутствовать отклонения от нормы. В подобном случае пациенту предлагают сдавать анализ на Фонио трижды, с периодичностью 2-3 дня. Это позволит наиболее полно и точно оценить состояние здоровья, а также минимизировать погрешность.
  3. Особые состояния организма – при менструации у женщин, беременности, в лактационный период результативность методики стремительно снижается. Дело в том, что гормоны, которые управляют женским организмом, постоянно подстраиваются под биологические процессы, контролируя их функциональность. У мужчин такие состояния могут наблюдать при сильной физической нагрузке, особенно это касается спортсменов и тяжеловесов.

Выявить истинные проблемы со здоровьем поможет только комплексное обследование всего организма, предпосылкой проведения которого является неудовлетворительный результат анализа крови по Фонио.

Таким образом, данный метод исследования уровня тромбоцитов не только удобен и прост в проведении, но и позволяет получать точные результаты.

Исчисления одной капли крови можно сопоставить с литром или микролитром, поэтому сразу будут видны отклонения от нормы, если они есть. Стоимость процедуры невелика, а продолжительность ожидания результатов не превышает 3 часов. Это позволяет быстро получить нужные данные в критических состояниях пациента, когда каждая секунда может стать последней.

Определение числа тромбоцитов возможно в крови, стабилизированной цитратом натрия или нанесенным на стенки пластиковой пробирки мелкодисперсным порошком этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). При использовании микроскопического метода предпочтительнее брать кровь на цитрате натрия, чтобы исключить влияние ЭДТА на результаты подсчета тромбоцитов.

У здорового человека число тромбоцитов в периферической крови колеблется в довольно широком диапазоне — от 150 до 400 х 109/л.

Недопустимо исследование числа тромбоцитов в охлажденных образцах крови. При гемолизе возможно занижение числа тромбоцитов. В ряде случаев при исследовании числа тромбоцитов на гематологических анализаторах встречается так называемая псевдотромбоцитопения, обусловленная агрегацией и группировкой тромбоцитов в присутствии ЭДТА. Эту проблему решает забор крови на цитрате натрия.

Для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов на гематологических анализаторах существуют контрольные образцы с разным содержанием этих клеток. О возможности использования этих образцов для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов микроскопическим методом не существует общепринятых рекомендаций.

Для повышения точности результатов микроскопического исследования следует периодически контролировать воспроизводимость результатов определения числа тромбоцитов разными лаборантами в течение рабочего дня и на основе полученных данных повышать точность и снижать вариацию при выполнении этой методики Коэффициент вариации микроскопического метода у опытных лаборантов не превышает 10 %.

В клинической картине тяжелого течения идиопатической тромбоцитопенической пурпуры доминирует геморрагический синдром. При вторичных тромбоцитопениях геморрагический синдром, как правило, умеренный, и сочетается с клиническими симптомами основного заболевания, обусловившими тромбоцитопению. В тех случаях, когда число тромбоцитов менее 100 х 109/л длительно наблюдается без каких-либо проявлений фонового заболевания, следует думать об идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Как производится подсчет?

Для определения тромбоцитарного индекса используют следующие реактивы:

  • магния сульфат — стерильный 14%-й раствор;
  • пигмент Романовского-Гимзы (красящее вещество);
  • фиксатор (Лейшмана или Май-Грюнвальда).

Процесс проведения:

  1. Палец вытирается насухо, прокалывается.
  2. На место прокола наносится капля раствора сульфата магния для смешивания с кровью.
  3. Из кровяной смеси делают мазки, которые сушат и окрашивают.

Подсчет тромбоцитов проводится по формуле: У = А х В/1000.

Где А — абсолютное значение эритроцитов, В — количество тромбоцитов.

Схема расчета следующая:

  1. В мазке вычисляют 1000 эритроцитов выявленные тромбоциты.
  2. Для получения абсолютного значения полученная величина умножается на количество эритроцитов на 1 мкл и делится на 1000.
  3. Полученная сумма выражается в промилле.

О чём свидетельствуют пониженные показатели?

Количество тромбоцитов во многом зависит от возраста и факторов, влияющих на изменение объема крови.

У грудничков диапазон значений довольно широкий, так как он определяется по общему состоянию ребенка. Относительно стабильными показатели становятся после 4 лет.

У представительниц слабого пола на показатели влияет то, на какой день и даже в какое время суток наступает менструальный цикл. От него зависит скорость выработки тромбоцитов.

Во время беременности и в период менструации показатели могут снижаться до 150 тыс/мкл, что считается нормой. Однако значение ниже этого уровня или постоянно сниженные показатели могут свидетельствовать о патологическом состоянии.

У мужчин процесс обновления клеток происходит с постоянной регулярностью. В связи с чем нижняя граница нормы у них выше, чем у женщин.

Если тромбоциты у человека понижены, это говорит о развивающейся тромбоцитопении. Она бывает:

  • при воздействии радиационного излучения;
  • при отравлении свинцом и другими веществами;
  • при разных болезнях системы крови;
  • если у человека развиваются коллагенозы;
  • при развитии хронического нефрита.

У людей с низким количеством тромбоцитов часто бывают внутренние кровотечения, кровоподтеки и гематомы, что является следствием понижения эластичности сосудов. Также обращают на себя внимание петехии, то есть точечные кровотечения.

Повышение количество тромбоцитов в крови (тромбофилия) наблюдается в таких случаях:

  • употребление некоторых лекарств;
  • если пациенту была сделана хирургическая операция;
  • если у человека была удалена селезенка;
  • после травм, если они сопровождались большой кровопотерей;
  • при развитии у человека злокачественных новообразований;
  • при железодефицитной анемии.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Если тромбоциты у человека повышены, это очень опасно для его здоровья и жизни
. В таком случае существенно повышается риск развития тромбоза. При этом внутри сосуда образуется сгусток крови, препятствующий нормальному кровотоку.

Особенно опасным считается повышение количества этих клеток у беременных. Это может иметь крайне неприятные последствия:

  • выраженный токсикоз беременных;
  • прерывание беременности;
  • выраженная задержка плода;
  • варикоз беременных;
  • тромбоз ног у беременных;
  • рост кровяного сгустка внутри сосуда (тромбоэмболия);
  • инфаркт.

Норма тромбоцитов по методу Фонио — от 120 до 400 тысяч в одном кубическом миллиметре крови. Однако у тех или иных групп населения полученные при анализе показатели будут существенно отличаться. Такие отличия являются вариантами нормы.

Итак, норма у детей от одного года — от 180 до 320 тысяч в одном миллиметре кубическом. У новорожденных детей нормальные пределы показателей тромбоцитов немного шире — от 100 до 420 тысяч в одном кубическом миллиметре крови.

У мужчин число тромбоцитов колеблется от 180 до 400 тысяч. Максимальное их количество наблюдается в 40-летнем возрасте. Далее происходит некоторое снижение количества тромбоцитов, однако оно не опускается ниже 320 тысяч.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Норма у женщин — 180-340 тысяч указанных элементов крови. Максимальное же количество бывает в 16 лет. Во время менструаций нормальный показатель этих клеток падает до 150 тысяч. У подростков это число может снизиться даже до 75 тысяч.

Меры по нормализации количества этих форменных элементов будут существенно отличаться в зависимости от того, какие результаты получены в ходе анализа. Но все меры будут бесполезными, если на организм продолжают воздействовать вредные факторы. Их надо устранить в первую очередь
. Надо стараться избегать эмоциональных и физических перегрузок.

Итак, повысить количество тромбоцитов можно такими способами:

  1. Исключить из рациона соления, спиртное, морскую капусту, виноград (красный).
  2. Включить в рацион такие продукты, как свежая рыба, печень, перец болгарский, яблоки, гречку.
  3. Врач назначит необходимые лекарства для подъема количества тромбоцитов в крови. Самолечение ими категорически запрещается!
  4. Не использовать те лекарства, которые в качестве своих побочных эффектов имеют тромбоцитопению.
  5. Принимать витамины, такие как А, группы В, С.

Чтобы снизить количество этих форменных элементов крови, надо в первую очередь наладить образ жизни и уменьшить количество стрессов. Нельзя заниматься травмоопасными видами спорта.

Чтобы понизить количество этих клеток крови, нужно:

  • употреблять препараты ацетилсалициловой кислоты в рекомендованных врачом дозах;
  • отказаться от плодов шиповника, бананов, манго, граната, потому что такие продукты повышают число тромбоцитов;
  • ввести в рацион побольше клюквы, черники, облепихи, свеклы и других продуктов;
  • принимать поливитамины и препараты магния;
  • соблюдать суточное количество воды и не допускать обезвоживания.

Как видим, метод подсчета тромбоцитов по Фонио отличается высокой точностью. И если анализ показал расхождения с нормой, можно быстро и эффективно скорректировать показатель этих форменных элементов крови и не допустить опасных последствий.

Если же не устранять нарушения, связанные с отклонениями количества таких клеток от нормы, возможно развитие очень серьезных патологий.

Анализ тромбоцитов по Фонио — это распространенный метод микроскопического исследования, позволяющий получить наиболее информативные и точные данные.

Рассмотри в чем суть этого анализа, как он проводится, какие преимущества и недостатки у него существуют и каковы нормальные показатели.

Роль тромбоцитов

  • Тромбоциты — это самые мелкие безъядерные элементы крови сферической формы, образующиеся в процессе синтеза из крупных клеток (мегакариоцитов) костного мозга.
  • Они играют важнейшую роль в механизмах первичного и вторичного гемостаза, при повреждении сосудов.
  • Тромбоциты стоят на первой линии обороны при возникновении кровотечений.
  • Более того, они являются источником ферментов (факторов регенерации и роста), которые способствуют следующим процессам:
  • стимулируют клеточный синтез;
  • регенерируют ткани;
  • содействуют эластичности стенок артерий;
  • участвуют в регуляции уровня проницаемости клеточных мембран.

Как и лейкоциты, тромбоциты имеют свой цикл жизнедеятельности (не более 7 дней) и деление по фазе созревания — молодые, зрелые, старые. Однако процесс старения у них выражен наиболее ярко.

В норме у здорового человека уровень зрелых клеток должен колебаться в пределах 95%.

Отклонения от нормы указывают на следующее:

  • высокая концентрация молодых клеток — развитие многочисленных нарушений в кровеносной системе;
  • присутствие в крови дегенеративных (старых) клеток — дестабилизация производства и переработки кровяных телец.

По количеству тромбоцитов можно определить состояние свертывающей системы человека. Превышение нормы носит название тромбоцитоз, понижение — тромбоцитопения.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ТРОМБОЦИТОВ В КРОВИ

Микроскопический метод подсчета

Чаще всего используется метод подсчета тромбоцитов в счетной камере Горяева микроскопией при фазовом контрасте, т. е. с фазово-контрастной приставкой. Мало точен и не может быть рекомендован метод подсчета тромбоцитов в мазке крови.

В настоящее время все шире используются определение количества тромбоцитов и их распределение по величине (гистограмма) с помощью автоматических счетчиков крови. Эти аппараты точны и позволяют проводить экспресс-диагностику (определения выполняются за 1 мин).

Принцип. Производится подсчет тромбоцитов в камере Горяева с применением в качестве разводящей и гемолизирующей жидкости раствора оксалата аммония . При подсчете используют фазово-контрастную микроскопию.

Реактивы. 1% раствор оксалата аммония.

Ход определения. Исследование можно проводить как в крови, полученной из пальца, так и в стабилизированной цитратом венозной крови. В последнем случае полученный при подсчете результат умножают на коэффициент 1,1 (учитывают разведение венозной крови раствором цитрата натрия — 9:1).

Разведение крови. Самым удобным и достаточно точным является способ разведения крови в пробирках (не в меланжере). Для этого, в предварительно высушенную чистую силиконированную или пластиковую (полистирол) пробирку пипеткой отмеривают 1,98 мл 1% оксалата аммония и осторожно вносят в нее 0,02 мл крови. В течение 1-2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивают без вспенивания.

Фазово-контрастная микроскопия проводится при помощи обычного микроскопа, осветителя типа ОИ-19 (или аналогичного) и устройства для наблюдения методом фазового контраста КФ-1 или КФ-4.

Подготовка микроскопа. После установки на микроскопе фазовых объективов и фазового конденсора производят фокусировку объективов 40х на сетке камеры Горяева. Устанавливают освещение и центрируют изображение фазовой пластинки и кольцевой диафрагмы. Микроскопию проводят с зеленым светофильтром. При работе с фазово-контрастной установкой необходимо пользоваться камерами одного типа, так как фокусировка оптических систем зависит от толщины стекла камеры.

Расчет определения числа тромбоцитов в 1 мкл крови. Среднюю арифметическую величину из двух параллельных определений умножают на 1000 (площадь 25 больших квадратов — 1 мм2, высота камеры — 0,1 мм, разведение 1:100; следовательно, количество тромбоцитов должно быть умножено на1 х10х100 = 1000).

Нормальные пределы колебаний числа тромбоцитов в крови у человека составляют от 170 до 350 х 109/л. Ошибка метода ± 6,5%.

Подсчет тромбоцитов в крови и определение их размера в мазке — важная часть диагностики тромбоцитопений, эссенциальной и полицитемической тромбоцитемии, ДВС-синдрома, тромботической тромбоцитопенической пурпуры и других микротромбоваскулитов, нарушений гемостаза при аутоимунных формах патологии (СКВ, антифосфолипидном синдроме и др.

Идиопатическая (аутоиммунная) тромбоцитарная пурпура

Аутоантитела против неизмененных антигенов тромбоцитов больного

Гаптеновая (гетероимунная) тромбоцитопения

Гаптеновые аутоантитела против измененных или чужеродных антигенов на поверхности тромбоцитов

Лекарственная тромбоцитопения

Антитела против комплекса лекарства (хинин, гепарин) с тромбоцитарным антигеном

Тромбоцитопения, ассоциированная с вирусной инфекцией

Антитела против вирусных антигенов, фиксированных на поверхности тромбоцитов, или против измененных тромбоцитарных антигенов

Аллоиммунная тромбоцитопения

Аллоантитела против аллоантигенов тромбоцитов плода или переливаемых тромбоцитов

Неонатальная аллоиммунная тромбоцитопеническая пурпура

Аллоантитела матери, проникшие в организм плода. Направлены против аллоантигенов тромбоцитов плода и отца, отсутствующих на тромбоцитах матери

Почему они могут быть понижены или повышены?

При отклонениях от нормы назначают повторный анализ. Если результаты подтверждаются неоднократно, то это говорит о развитии патологии.

Превышение нормы (тромбоцитоз или тромбофилия) происходит на фоне следующих деструктивных состояний:

  • нарушение работы костного мозга;
  • менингококковая инфекция;
  • наличие в организме воспалительного процесса;
  • некроз в тканях;
  • развитие онкологии (лимфогранулематоз, миелолейкоз);
  • прием медикаментозных средств;
  • после удаления селезенки;
  • серьезные кровопотери после открытой травмы или хирургической операции (стентирование, коронарное шунтирование);
  • дисфункция работы печени или почек (эритроцитоз, рак);
  • туберкулез или пневмония;
  • хронические заболевания кроветворной системы;
  • общие факторы — физические перегрузки, обезвоживание, отравление, стрессы.

Если тромбоциты повышены у женщины в период беременности, то это опасное состояние, угрожающее серьезными осложнениями:

  • токсикоз ярко выраженной формы;
  • выкидыш (произвольное прерывание беременности);
  • задержка развития у плода;
  • варикозное расширение вен;
  • тромбоз (или тромбофлебит) нижних конечностей;
  • тромбоэмболия (закупорка кровеносного сосуда мозга, сердца, легочной артерии и т. д.), на фоне которой развиваются инфаркты, инсульты и даже гангрены.

Низкие показатели или тромбоцитопения часто наблюдается у недоношенных малышей. Подобные аномалии обычно возникают на фоне недоразвития органов или систем.

Факторы, способствующие снижению тромбоцитов у новорожденных:

  • инфицирование плода внутри утробы;
  • несовместимость группы крови у матери и плода;
  • асфиксия во время родов;
  • наследственная анемия.

Причины понижения тромбоцитов у взрослых людей и детей старше 4 лет:

  • облучение (радиация);
  • интоксикация ядами или химией (свинцом);
  • болезни крови;
  • злокачественная онкология;
  • аллергии сложного типа;
  • коллагенозы;
  • заболевания печени (цирроз, гепатит);
  • после гемодиализа;
  • дисфункции щитовидной железы;
  • инфекции различной этиологии;
  • аутоиммунные патологии;
  • обильные кровопотери;
  • хронический нефрит;
  • алкоголизм;
  • наследственность.

Недостаток тромбоцитов часто сопровождается следующими симптомами:

  • частые кровотечения из носа;
  • подкожные и внутренние геморрагии;
  • петехии (точечные геморрагии);
  • обширные гематомы или кровоподтеки;
  • обильная менструация, которая длится больше обычного.

Для установки точного диагноза требуется дополнительное инструментальное обследование, а также посещение врачей узкого профиля.

Когда нужен анализ крови с подсчетом тромбоцитов?

Тромбоциты по Фонио: норма, подсчет, что это такое? Тромбоцит (PLT, platelet) – безъядерная дискообразная клетка крови, активирующая каскад свертывания крови при повреждении. Анализ тромбоцитов — важный анализ для диагностики большого числа нарушений. Тромбоциты по Фонио — метод для оценки числа тромбоцитов под микроскопом.

Анализ на тромбоциты входит в состав общего анализа крови (клинического анализа крови). Сдать анализ можно в утренние часы натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи). Для анализа берется кровь из вены, в некоторых случаях возможен забор крови из пальца.

Пройти обследование можно любой из наших клиник. Мы работаем без выходных и праздников. Экспресс-анализы выполняются в будние и выходные дни от 1 часа.

Референсный интервал у взрослых мужчин и женщин зависит от лаборатории, в основном от 140-180 до 350-450 тысяч клеток /микролитр.

Снижение уровня ниже референсного интервала называется тромбоцитопенией. При выявлении тромбоцитопении назначаются необходимые дополнительные обследования, так как тромбоцитопения может быть связана с многими заболеваниями.

Уровень выше референсного интервала называют тромбоцитозов. Это состояние также требует дополнительных обследований.

Для расшифровки анализа обязательно обратитесь к врачу!

При выявлении тромбоцитопении или тромбоцитоза обязательно проводится оценка мазка крови под микроскопом по методу Фонио. Методика основана на подсчете числа этих клеток в окрашенном мазке крови на 1000 эритроцитов с пересчетом на 1 мл крови.

Во время подсчета тромбоцитов по Фонио исключается псевдотромбоцитопения, то есть ложное снижение уровня клеток, которое встречается в случае склеивания их между собой или наличия гигантских клеток. При оценке под микроскопом можно увидеть не только увеличенные клетки (макротромбоциты), но и микротромбоциты, анизоцитоз тромбоцитов (когда все клетки разного разного размера).

Методика подсчета по Фонио: в окрашенном мазке считают 1000 эритроцитов и все встретившиеся при этом тромбоциты. Так получают относительное число в промилле. Для вычисления абсолютного числа эту величину следует умножить на количество эритроцитов в 1 мкл и разделить на 1000.

При тромбоцитопении и наличии геморрагического анамнеза с раннего детского возраста весьма важно оценить размер тромбоцитов, в т. ч. MPV (средний объем) в мазке крови, а также наличие каких-либо включений в тромбоциты.

Клинический анализ крови с подсчетом тромбоцитов проводится в следующих случаях:

  • диспансеризация человека с проведением общего анализа крови для профилактики появления различных заболеваний;
  • симптомы повышенного количества тромбоцитов, вследствие которых может произойти закупорка сосуда (повышенное давление, онемение конечностей);
  • клинические проявления сниженного количества кровяных пластинок (постоянное появление синяков и гематом, бледность кожных покровов);
  • проведение повторного анализа, если первый тест показал нарушение.

Во всех перечисленных случаях необходимо обратиться к врачу для проведения общего осмотра. Он назначит методику, которая будет наиболее приемлемой для пациента, чтобы правильно поставить диагноз.

  • использование камеры Горяева;
  • методика по Фонио;
  • использование полуавтоматического анализатора.

Все методики применяются в клинических учреждениях. Каждая из них имеет положительные и отрицательные стороны. Возможен подсчет тромбоцитов ручным методом для просмотра их формы и размера. Если врач будет сомневаться в точности результата, он может назначить подсчет клеток с помощью полуавтоматического анализатора.

Унифицированными является методики, которые считаются более точными. Для подсчета кровяных пластинок таким тестированием является методика по Фонио и применение камеры Горяева.

С помощью анализов можно не только почитать точное число клеток, но и изучить их строение. Возможно определение раковых атипичных клеток.

К анализам с ручным подсчетом тромбоцитов относятся использование камеры Горяева и метода по Фонио. Для обоих исследований осуществляется подсчет тромбоцитов в мазке под микроскопом. Полученные цифры подставляют в формулу, с помощью которой результат из 1 мкл переводится на 1 л крови.

Для подсчета тромбоцитов по методике Горяева необходимо приготовить раствор, состоящий из следующих веществ:

  • реактив 1 (кокаина гидрохлорид 3 г, натрия хлорид 0,25 г, фурацилин 0,25 г, дистиллированная вода 100 мл);
  • Реактив 2 (раствор оксалата аммония 1%).

Чаще всего применяют раствор оксалата аммония. Он эффективно уничтожает эритроциты, возможен свободный подсчет кровяных пластинок.

Рекомендуется для исследования выбирать венозную кровь. При использовании капиллярной биологической жидкости повышается риск образования сгустка. Если произойдет агрегация тромбоцитов, корректный подсчет количества тромбоцитов будет невозможен. К крови добавляют раствор ЭДТА, который препятствует образованию сгустка.

В пробирку наливают 0,02 мл крови, добавляют 4 мл реагента 1 или 2. Получившуюся массу перемешивают. В течение 30 минут должен произойти полный гемолиз красных кровяных телец. Пипеткой отбирают полученную жидкость, добавляют в камеру Горяева.

Внимание! Для осаждения кровяных пластинок камеру Горяева с жидкостью помещают во влажную среду. Кладут счетную камеру под микроскоп и подсчитывают форменные элементы.

Тромбоциты считают в 25 больших квадратах. Для этого микроскоп перемещают слева направо, вниз, справа налево. Кровяные пластинки под микроскопом выглядят, как небольшие фиолетовые точки.

X=a×250×200/25

  • X – число тромбоцитов на 1 мкл биологической жидкости;
  • a —  количество тромбоцитов в 25 квадратах;
  • 200 – разведение крови;
  • 25- количество квадратов;
  • 1/250 – объем одного квадрата.

После завершения методики все используемые приспособления дезинфицируют с помощью этилового спирта.

Для методики используют капиллярную кровь, взятую из пальца. Ее помещают в капилляр, добавляют один из следующих реактивов, препятствующих образованию сгустка:

  • раствор ЭДТА 2, 6%;
  • раствор сульфата магния 14%.

Жидкость необходимо тщательно перемешать. Каплю разведенной крови добавляют на предметное стекло, размазывает пластиковым шпателем. Полученный мазок фиксирует с помощью метода по Романовскому-Гимзе.

Важно! Время фиксации зависит от применяемого реактива. Для ЭДТА оно составляет 40 минут, для сульфата магния — до 3 часов.

Мазок рассматривают под микроскопом, считают эритроциты и тромбоциты до получения значения, равного 1 тыс. Необходимо перемещать микроскоп слева направо, вниз, справа налево до тех пор, пока не будет достигнута данная цифра.

Для пересчета количество тромбоцитов 1 мкл на 1 литр крови число эритроцитов и тромбоцитов перемножают, делят на 1 тысячу.

Подробно о подсчете тромбоцитов по Фонио.

Для метода подсчета количества тромбоцитов используют капиллярную или венозную кровь. Добавляет антикоагулянт, чтобы она не свернулась. Если это произойдет, потребуется повторное изъятие биологической жидкости. Жидкость подносят к полуавтоматическому анализатору, который забирает объем жидкости, равный 1 мл.

Прибор самостоятельно подсчитывает данные, выдавая их на бланке исследования. Читайте о домашних анализаторах крови.

Подсчет в крови тромбоцитов производят по указанию врача. На очищенный спиртом и эфиром палец больного помещают каплю стерильного 14% раствора сернокислого магния или 5% раствора лимоннокислого натрия и через каплю реактива делают укол в палец. Выступившую каплю крови смешивают с помощью парафинированной стеклянной палочки или пастеровской пипетки с реактивом, готовят мазки крови и окрашивают их в течение 40-60 минут краской Романовского, разведенной на нейтральной дистиллированной воде так же, как для мазков крови.

Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет. Параллельно в смеситель берут кровь для подсчета эритроцитов (см. тему « »).

Подсчет тромбоцитов производят с ограничителем поля зрения (по Фонио). Для этого из кусочка бумаги вырезают кружок, по размеру равный 15-копеечной монете, складывают пополам и вчетверо, вершину конуса срезают, в результате чего в центре круга образуется «окошко» (рис. 35). Ограничитель поля зрения вставляют в окуляр (на металлический мостик), предварительно сняв верхнюю линзу окуляра.

Вновь навинтив верхнюю линзу, вставляют окуляр в тубус микроскопа. С ограничителем поля зрения насчитывают в среднем 50 эритроцитов в каждом поле зрения микроскопа. Пользуясь иммерсионной системой, одновременно в мазке подсчитывают эритроциты и тромбоциты. Подсчет тромбоцитов заканчивают, насчитав 1000 эритроцитов.

Пример расчета.
На 1000 эритроцитов подсчитано 70 тромбоцитов. Количество эритроцитов в 1 мм3 крови (подсчитаны в камере Горяева) составляет 4 200 000. Количество тромбоцитов в 1 мм3 равно:70×4200000/1000 = 294 000.

Практически количество подсчитанных тромбоцитов умножают на первые четыре цифры числа эритроцитов, подсчитанных в камере Горяева. Норма тромбоцитов при подсчете по этому методу 200 000-400 000 в 1 мм3.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Для измерения количества тромбоцитов используется артериальная кровь (из пальца). Забор материала обычно проходит с утра, поскольку для получения достоверных результатов важно, чтоб пациент не ел в течение 8 – 10 часов и избегал физических нагрузок.

Первую каплю крови, появляющуюся сразу после прокола, обычно не используют для проведения анализа.

Лаборант должен протереть палец сухой стерильной марлей или ватой, а к забору биоматериала приступить только со второй появившейся капли крови.

Для проведения исследования кровь необходимо смешать с 14 % раствором магнезии, чтобы предотвратить свертывание. Лаборант может нанести раствор непосредственно на палец или в пробирку.

Для более быстрого получения результатов в пробирке кровь могут смешать с раствором ЭДТА. Далее к полученному биоматериалу добавляют специальные реагенты и наносят на предметное стекло.

После того как мазок высохнет, его начинают окрашивать, чтобы фракции кровяных клеток можно было рассмотреть под микроскопом. Окраска может занять от получаса до нескольких часов в зависимости от качества реагентов.

Подсчет проводят визуально, с использованием специальных сегментированных окуляров. На такие окуляры нанесена специальная расчетная сетка, которая облегчает подсчет.

Окрашенный тромбоцит приобретает розоватый или фиолетовый оттенок, в зависимости от возраста клетки. Именно поэтому тромбоциты принято называть красными кровяными тельцами.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио производят относительно количества эритроцитов. Предметное стекло с мазком постепенно передвигают под микроскопом и считают количество эритроцитов.

Как только счет достигает 1000, переходят к подсчету тромбоцитов на этом же участке. При исследовании учитываются только скопления клеток.

Кровяные тельца, находящиеся в относительном удалении от группы клеток аналогичного типа, считаются исключением и медицинского значения не имеют.

В некоторых лабораториях исследование проходит почти полностью автоматически. Современные микроскопы способны распознавать различные типы кровяных клеток и производить расчет без помощи человека. Такие микроскопы подсчитывают общее количество различных кровяных клеток и их соотношение.

Количество тромбоцитов подсчитывают относительно к эритроцитам, поскольку это самые крупные кровяные клетки.

Кроме того, количество тромбоцитов на микролитр крови имеет прямую зависимость с количеством эритроцитов: если вследствие какой-либо патологии увеличивается содержание эритроцитов, общее число тромбоцитов будет превышать допустимую норму.

Подсчет тромбоцитов по Фонио имеет свои преимущества. При таком исследовании результаты могут быть готовы очень быстро, от 20 минут.

Для проведения анализа не требуется дорогостоящих реагентов, только антикоагулянт и красители. С другой стороны, составление коагулограммы (более полного описания состава крови) более целесообразно, если необходимо получить общее представление о здоровье пациента.

При коагулограмме можно исследовать различные показатели, используя достаточно малое количество биологического материала, пациенту не придется сдавать кровь несколько раз.

Достоверность полученных результатов зависит как от самого пациента, так и от лаборатории. Важно, чтобы при проведении исследования использовались только качественные реагенты.

Просроченные или дешевые химические составы могут значительно исказить результаты анализа. В лучшем случае врач сможет определить, что результаты неверны, и назначить повторную сдачу анализа.

В худшем – врачу будет сложно установить правильный диагноз, особенно если показатели крови расходятся с общей клинической картиной.

Помимо качества химических составов, на достоверность результатов влияет и соблюдение технологического процесса проведения исследования.

Соблюдение стерильности, правильная маркировка пробирок, точное соблюдение сроков окрашивания и подсушки, качество оборудования – все это может оказать значительное влияние на достоверность полученных результатов.

Со стороны пациента ответственность за качество исследования заключается в соблюдении правил подготовки к анализу.

Кровь необходимо сдавать строго натощак, по истечении как минимум 8 часов с последнего приема пищи.

Перед забором крови нельзя заниматься спортом: утреннюю пробежку и тренировку в спортзале необходимо перенести.

За 24 часа до проведения анализа пациент должен отказаться от алкогольных напитков, поскольку спирт увеличивает количество лейкоцитов и тромбоцитов в несколько раз.

За 2-3 дня до анализа стоит избегать стресса, повышенных физических нагрузок и психоэмоциональных перегрузов: все эти факторы способны временно изменить состав крови, нарушив соотношение различных типов кровяных тел.

Если вы находитесь на медикаментозном лечении, то необходимо согласовать с врачом прием медикаментов накануне сдачи анализа.

Некоторые лекарственные препараты могут внести временные изменения в состав крови. Врач либо порекомендует отказаться от медикаментов за 8 – 20 часов до сдачи анализа, либо будет принимать во внимание текущее лечение при расшифровке результатов исследования.

В справке о результатах анализа обычно указывается количество тромбоцитов по Фонио и норма, с которой пациент может сравнить свои показания.

Допустимое содержание тромбоцитов в одном кубическом миллиметре крови различается для мужчин и женщин, и довольно сильно зависит от возраста.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Для младенцев до года пределы нормы достаточно широки: от 100 до 400 тысяч на миллиметр кубический крови. После года норма для ребенка становится аналогичной норме для взрослых: от 180 до 350 тысяч.

Для мужчин до 40 – 45 лет нормальным считается содержание от 180 до 400 тысяч. Чем старше мужчина, тем большее количество тромбоцитов в крови допустимо.

Но в преклонном возрасте уровень тромбоцитов должен несколько сократиться, до максимально допустимого значения в 320 тысяч.

У женщин колебания уровня тромбоцитов в крови связано с возрастом. Максимум в 350 тысяч отмечается в период активного полового созревания, около 15 лет.

Несмотря на то, что и в дальнейшем такой уровень тромбоцитов все еще входит в понятие нормы, в большинстве случаев уровень этих кровяных тел несколько падает.

При менструации количество тромбоцитов сокращается вдвое. Это вызвано природным механизмом: для полноценного отторжения эпителия в матке (менструальные выделения) необходима пониженная свертываемость крови.

Сдавать анализ во время месячных женщинам не рекомендуется, оптимальными считаются первые несколько дней после окончания активных менструальных выделений.

Тромбоцитозы

Тромбоцитоз

Заболевания и синдромы

Реактивный

Спленэктомия, острая кровопотеря, острый гемолиз, состояние после операции, злокачественные новообразования, ревматоидный артрит, туберкулез, язвенный колит, остеомиелит

Опухолевый

Миелопролиферативные заболевания (хронический миелолейкоз, идиопатический миелофиброз, эритремия, хронический мегакариоцитарный лейкоз), острый мегакариобластный лейкоз, идиопатическая геморрагическая тромбоцитемия

Средний объем тромбоцита (МРV)

У здоровых людей MPV равен 6-12 фл и находится в обратной зависимости от числа тромбоцитов. MPV увеличивается с возрастом. У мужчин MPV несколько выше, чем у женщин.

Использование ЭДТА в качестве антикоагулянта вызывает изменение формы тромбоцитов от диска к сфере, что приводит к увеличению MPV на 10-12% в течение 2 часов, а затем показатель существенно не меняется. Под действием цитрата натрия MPV может уменьшаться или увеличиваться, а при высокой концентрации (1:4) — не изменяется со временем.

Кроме типа применяемого антикоагулянта и времени от момента взятия пробы до исследования, на MPV оказывает влияние температура окружающей среды. Преходящее увеличение MPV отмечается у рабочих, контактирующих с асфальтовыми испарениями, органическими растворителями. MPV — важный диагностический показатель функции тромбоцитов.

PDW — показатель, являющийся мерой гетерогенности размеров (анизоцитоза) тромбоцитов. Величина PDW в среднем составляет 10-15%.

Как артефакт, ложно завышенное увеличение PDW может быть связано с присутствием микроцитов, шизоцитов, микроагрегатов тромбоцитов, фрагментов цитоплазмы лейкоцитов.

Этот показатель находится в обратной зависимости от числа тромбоцитов и их периода жизни. В каждом конкретном случае важна не только величина PDW, но и ее динамика во времени, а также связь с другими тромбоцитарными показателями. Так, увеличение PDW с одновременным снижением MPV свидетельствует о преобладании микротромбоцитов среди общей популяции тромбоцитов (указывает на угнетение тромбоцитопоэза), а сочетание повышенного PDW с увеличением MPV отражает нарастание числа макротромбоцитов (усиление продукции тромбоцитов).

PDW
может применяться для дифференциальной диагностики. Так, увеличение PDW свыше 15% было обнаружено у 50% больных эссенциальной тромбоцитемией, у 21% пациентов с реактивным тромбоцитозом и лишь у 14% здоровых людей.

РСТ
— показатель, характеризующий процент тромбоцитарной массы в объеме крови: вычисляется суммированием прямо измеренных объемов тромбоцитов или произведением среднего объема тромбоцитов на их число.

У здорового человека показатель стремится остаться стабильным: при уменьшении числа тромбоцитов усиливается тромбопоэз, в циркулирующую кровь выбрасывается большее число молодых макротромбоцитов, что ведет к увеличению MPV. При увеличении количества циркулирующих тромбоцитов снижается продукция их в костном мозге, тем самым уменьшается процент макротромбоцитов и MPV уменьшается.

Нормальные значения РСТ варьируют в пределах 0,15-0,35%. Было обнаружено, что снижение РСТ менее 0,1% обусловило возникновение послеоперационных кровотечений у пациентов с развившейся тромбоцитопенией. Также было отмечено, что этот показатель оказался более чувствительным для оценки риска возникновения кровотечения, чем число тромбоцитов.

Роль тромбоцитов

Суть данного анализа

Достоинством этого метода является достаточно точное определение количества этих кровяных клеток, что, естественно, ведет к более точной постановке диагноза.

Разберемся, как именно осуществляют подсчет тромбоцитов по Фонио.

Общее количество тромбоцитов в определенном мазке крови представляет собой коагулограмму. Для проведения данного анализа забирают капиллярную кровь из пальца. Сдавать этот анализ необходимо каждому обследуемому пациенту, так как его результаты могут помочь лечащему врачу установить наличие или отсутствие многих опасных заболеваний.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Во время сдачи анализа на уровень тромбоцитов в крови следует учитывать следующее:

  • Концентрация этих кровяных телец оказывается максимальной после приёма пищи и физических нагрузок. По этой причине сдавать материал необходимо по истечении не менее восьми часов после последней трапезы.
  • Данное требование относится и к физическим нагрузкам: если пациент сдаст кровь в состоянии возбуждения или после тяжелых физических нагрузок, то результат может оказаться ложным.
  • Кровь необходимо сдавать рано утром.
  • Для достижения максимальной точности анализ необходимо провести еще дважды с промежутком в 3-5 дней.

Подсчет результатов

Для подсчета количества тромбоцитов по Фонио используют 2,6%-й раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА) и 14%-й раствор сульфата магния. Реактивы набирают с помощью пипетки к СОЭ-метру (или капилляра Панченкова).

  1. Сначала в пробирку вводят один из реактивов, который в капилляре должен находиться на уровне деления 75. Туда же добавляют кровь, взятую пипеткой (до уровня деления К).
  2. Компоненты тщательно перемешиваются, а затем подготавливаются тонкие мазки.
  3. После этого мазки окрашивают по методике Романовского-Гимзе в течение 35-45 минут, если был использован ЭДТА, или на протяжении двух-трёх часов, если применялся магния сульфат. В течение этого временного промежутка тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.

Как проводится подсчёт тромбоцитов по методу Фонио? Для этого в поле зрения микроскопа проводят подсчет тромбоцитов и эритроцитов до 1000 красных кровяных клеток.

Число тромбоцитов в плазме крове узнают, умножая их количество в мазке на число эритроцитов в 1 мкл, а затем полученное значение делят на 1000.

Специфический цвет помогает врачу более точно подсчитать количество исследуемых клеток.

Исследование обладает высокой точностью, поэтому большое количество врачей используют результаты, полученные данным способом.

Особенности метода

Данный метод обладает следующими достоинствами по сравнению с другими:

  • лаборант может очень хорошо рассмотреть все клетки крови под микроскопом;
  • кровь можно исследовать в любое удобное время, не привязываясь к моменту получения материала;
  • клетки подсчитываются по достаточно простой формуле, помимо этого, число зависит от 1000 эритроцитов в микролитре крови.

Что выявляет анализ тромбоцитов по Фонио?

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Состав крови

В лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, но методы микроскопического анализа остаются наиболее информативными и точными. Один из таких методов – микроскопия мазка по Фонио для подсчета количества тромбоцитов.

Микроскопию мазка используют в тех случаях, когда результаты исследований автоматического подсчета гемоанализаторами значительно отклоняются от нормы.

Тромбоциты по Фонио подсчитываются по формуле, привязанной к значению абсолютного количества эритроцитов в крови.

Поэтому методика является частью общего исследования крови и выполняется после автоматического подсчета количества других клеток крови (эритроцитов).

Тромбоциты

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Тромбоциты – безъядерные клетки, образуемые из мегакариоцитов костного мозга. После созревания и попадания в кровь клетка живет 5-7 суток. Старые клетки утилизируются печенью и селезенкой. Процесс старения у этих клеток особо выражен.

Тромбоциты, как и другие клетки крови, делятся на юные, зрелые и старые. В норме в крови содержится не менее 95% зрелых клеток. Выброс в кровь незрелых клеток может быть вызван фактором раздражения (множественные повреждения сосудов). В крови могут быть обнаружены и дегенеративные, старые клетки, что свидетельствует о патологии процесса созревания и утилизации.

Тромбоциты – главные участники процессов тромбообразования. Вместе с тем, выделяя особые ферменты, они стимулируют деление клеток и регенерацию тканей, регулируют уровень проницаемости мембран клеток, поддерживают эластичность стенок сосудов.

По их количеству можно определить состояние здоровья сердечно-сосудистой системы. Повышенное количество называют тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Функции клеток

Тромбоциты хорошо окрашиваются красителями. В зависимости от степени зрелости клетки окрашиваются с разной интенсивностью, что упрощает дифференциальную диагностику их морфологического состава.

Клетки подсчитывают разными способами. Камера Горяева и метод Фонио принципиально похожи и являются самыми распространенными. Суть метода Фонио заключается в параллельном подсчете окрашенных клеток эритроцитов и тромбоцитов в полях сетки микроскопа. В камере Горяева эта сетка нанесена лазером на само стекло.

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

  • В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА);
  • Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
  • Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Метод подсчета тромбоцитов по методу Фонио популярен не только из-за простоты и низкой себестоимости. В отличие от подсчета тромбоцитов в камере Горяева микроскопию мазка по Фонио можно выполнить через несколько часов или дней после сдачи анализа. Лабораториям, заваленным текущими заявками, это позволяет снизить пиковые нагрузки, связанные с утренними наплывами пациентов.

Кроме того, возможность повторной микроскопии через несколько дней позволит сравнить показания или уточнить результат подсчета.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

После прокола пучки первая капля не используется, ее удаляют ваткой. Для мазка берут вторую каплю. Обычно коагулянт добавляют в выступившую каплю крови и сразу помещают образец на стекло. Но лаборант может смешивать кровь с коагулянтом в пробирке.

Мазки фиксируются и окрашиваются методом Паппенгейма. При нанесении на приготовленный мазок крови нескольких капель раствора фиксатора клетки приклеиваются к стеклу. Гематологические фиксаторы способны прокрашивать клетки, что ускоряет процесс подготовки мазка.

После промывания мазок высушивают в сушильном шкафу и приступают к исследованию при помощи микроскопа, оснащенного иммерсионным объективом и сегментированными окулярами.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает подсчет тромбоцитов в мазке крови. Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Мазок под микроскопом

Параллельный подсчет количества эритроцитов и тромбоцитов начинают с одного сектора, и, передвигая окуляр, переходят к следующему сектору. Подсчет заканчивают, когда число эритроцитов достигнет 1000.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

После того как получено число тромбоцитов, привязанное к 1000 клеток эритроцитов, приступают к вычислению абсолютного количества клеток в единице объема крови. Для этого понадобится значение абсолютного количества эритроцитов крови данного пациента, полученное в автоматическом анализаторе.

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Низкое качество оборудования и нечеткое следование методике исследования может повлиять на достоверность результата. Причины получения искаженных данных:

  • Использование некачественных химикатов;
  • Неправильная подготовка растворов;
  • Несоблюдение сроков окрашивания;
  • Неправильный режим сушильной камеры.

В условиях массового выполнения микроскопии особое значение имеет правильная организация работы, маркировка и хранение образцов.

Получение объективных результатов зависит не только от правильного выполнения всех требований методики лаборантом, но и от самого пациента. Он должен ответственно подойти к процедуре обследования и подготовиться к сдаче анализа:

  • Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
  • Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
  • Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
  • Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Описания некоторых лекарств (гепарин, простагландин, аденозин) содержат информацию о том, что препарат временно может влиять на состав крови. Пациент обязательно должен поставить врача в известность о любых принимаемых препаратах. Врач оценит вероятность искажения результатов анализа и примет взвешенное решение о временной отмене этого средства.

В стандартном лабораторном бланке тромбоциты обозначаются PLT. Единица, в которой представлены результаты, – тысячи единиц на микролитр. Обычно в лабораторных бланках для сравнения указана и норма.

Таблица нормального состава крови

Норма содержания в крови тромбоцитов для мужчин отличается от нормы для женщин. Она зависит и от возраста человека.

  • Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр;
  • Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

https://www.youtube.com/watch?v=arLn-Z53ib0

Норма для детей:

  • У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр;
  • У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр;
  • У детей до 5 лет – 180-380 тыс./ микролитр;
  • У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

Как делается анализ

Интерпретация результатов исследования

Как проводится подсчёт тромбоцитов по методу Фонио? Для этого в микроскопа проводят подсчет тромбоцитов и эритроцитов до 1000 красных кровяных клеток. Число тромбоцитов в плазме крове узнают, умножая их количество в мазке на число эритроцитов в 1 мкл, а затем полученное значение делят на 1000. Специфический цвет помогает врачу более точно подсчитать количество исследуемых клеток.

Норма тромбоцитов по Фонио интересует многих.

Тромбоциты по Фонио — анализ, позволяющий определить точное количество тромбоцитов в крови и узнать причины многих заболеваний. Эти кровяные клетки являются важным фактором сворачивания крови.

Рассмотрим, в чем состоит суть такого метода анализа крови и о чем говорят его показатели.

Нормы тромбоцитов, анализ по методу Фонио, способы нормализации

Состав крови

Тромбоциты

Функции клеток

Тромбоцитозы

Методы определения длительности кровотечения

Длительность кровотечения является скрининговым тестом для выявления нарушений первичного гемостаза. Метод основан на определении времени кровотечения из нанесенной на поверхности кожных покровов небольшой ранки стандартного размера. Это время зависит от способности сосудисто-тромбоцитарных гемостатических механизмов останавливать кровотечение из поврежденных мелких сосудов и капиллляров и поэтому его продолжительность может характеризовать состояние первичного гемостаза.

Оно может быть нарушено вследствие дефектов сосудистого звена, неполноценности функциональных свойств кровяных пластинок или дефицита/дефекта плазменных кофакторов тромбоцитарных реакций (фибриногена, фактора Виллебранда), выраженной тромбоцитопении. При снижении числа тромбоцитов менее 100×109/л имеется прямая связь между степенью тромбоцитопении и удлинением времени кровотечения.

Помимо решения диагностических задач тест рекомендуется проводить для контроля за эффективностью применяемой гемостатической терапии, для своевременного выявления угрозы геморрагических осложнений при проведении дезагрегационной терапии. Длительность кровотечения должна быть определена у больного в период предоперационной подготовки, т. к.

В настоящее время используют в основном два принципа при определении длительности кровотечения; проведение теста в условиях, не затрудняющих течение первичного гемостаза, и в условиях, препятствующих его осуществлению.

К первым методам относится тест Duke
, при выполнении которого колотую ранку глубиной 3,5 мм наносят скарификатором в нижней части мочки уха; выступающие капли крови осторожно, не прикасаясь к раневой поверхности, снимают фильтровальной бумагой через 15-30 с. Регистрируют время от момента нанесения укола до прекращения кровотечения, которое в норме не превышает 4 мин. Тест малочувствителен и не позволяет выявить нарушения при тромбоцитопатиях легкой и средней тяжести.

Наиболее распространенными за рубежом методами определения длительности кровотечения второй группы являются различные модификации метода Ivy, который предложил проводить исследование на верхней конечности в условиях веностаза, затрудняющего сосудистые реакции.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Определение длительности кровотечения по методу Айви

Принцип метода

Оценивают длительность кровотечения после разреза кожи предплечья скарификатором с глубиной разреза 3 мм. Стандартизация метода достигается равной глубиной кожного разреза и созданием венозного стаза путем повышения венозного давления до 40 мм рт. ст. при помощи сфигмома-нометра, что предупреждает эффект преждевременного склеивания краев раны.

70% раствор этанола.

Сфигмоманометр.

Скарификатор, способный осуществить разрез кожи глубиной 2-3 мм.

Ход выполнения

Сфигмоманометр накладывают на плечо, нагнетают в нем давление, равное 40 мм рт. ст., и поддерживают такое давление в течение всего исследования.

Ладонную поверхность предплечья обрабатывают раствором этанола.

Натягивают кожу предплечья в поперечном (по отношению к костям предплечья) направлении.

Скарификатором наносят три разреза кожи по 5-10 мм (направление разреза должно быть перпендикулярно натяжению кожи предплечья, т. е. параллельно костям предплечья) глубиной 3 мм и включают секундомер.

Капли крови осторожно удаляют фильтровальной бумагой путем ее смачивания через каждые 15-30 с.

Регистрируют время остановки кровотечения из каждой ранки.

Снижают давление в манжете сфигмоманометра.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Вычисляют средний результат длительности кровотечения для каждого из трех разрезов.

Существует несколько схожих методов для оценки длительности кровотечения , однако метод Айви отличается от аналогичных неплохой воспроизводимостью и малой травматичностью. В оригинальном исполнении нормальное время кровотечения не превышает 8 мин, однако указанный норматив условен, поскольку результаты определения длительности кровотечения этим методом значимо варьируют в зависимости от варианта скарификатора и опыта исследователя, поэтому необходимо уточнить нормативы для каждой лаборатории.

Причины ошибок

Нестандартный скарификатор, неглубокий (менее 3 мм) разрез кожи, недостаточная квалификация лаборанта.

Исследование агрегационной функции тромбоцитов

Принцип метода

Тромбоциты способны агрегировать под воздействием различных субстанций, называемых индукторами (стимуляторами) агрегации (АДФ, адреналин , арахидоновая кислота, тромбин, кальциевый ионофор А23187, коллаген , фибрин-мономер, бычий коагуляционный фактор VIII, ристоцетин и др.). Изучение агрегационной функции тромбоцитов осуществляют при помощи специального прибора — агрегометра.

В основе записи агре-гатограммы этим прибором — принцип Борна, который предполагает графическую регистрацию выраженности уменьшения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы в процессе агрегации тромбоцитов. В случае нарушения агрегационной функции тромбоцитов происходит незначительное изменение оптической плотности, что и регистрирует этот прибор.

Забор крови и подготовка плазмы для исследования

После пункции локтевой вены самотеком кровью наполняют пластиковую или силиконированную пробирку, в которую предварительно добавлен раствор цитрата натрия (соотношение объемов крови и цитрата натрия равно 9:1). Затем пробирку тщательно и аккуратно (без встряхивания) перемешивают в течение 2-3 минут.

Материалом для исследования является бедная тромбоцитами плазма.

БТП получают в два этапа. На первом этапе получают богатую тромбоцитами плазму, для чего цитратную кровь центрифугируют в течение 7 минут при 240 g. На втором этапе богатую тромбоцитами плазму переносят в другую пробирку и повторно центрифугируют в течение 15 минут при g.

0,11 М раствор цитрата натрия (Na3C6H507).

Агрегометр с компьютером и принтером.

Стимуляторы агрегации (АДФ, адреналин, коллаген и др.). В табл. 12 представлены оптимальные конечные концентрации наиболее распространенных стимуляторов агрегации тромбоцитов.

Таблица. Оптимальные конечные концентрации стимуляторов агрегации тромбоцитов

Индукторы тромбоцитарной агрегации

Конечные концентрации индукторов

Адреналин

Коллаген

Арахидоновая кислота

Ристоцетин

Ристоцетин для диагностики 2В типа болезни Виллебранда

Для проведения анализа предварительно необходимо подсчитать число тромбоцитов на гематологическом анализаторе или микроскопическим методом.

Ход определения

Материалом для исследования является богатая тромбоцитами плазма, но для калибровки прибора необходима еще и бедная тромбоцитами плазма.

Поскольку при разном числе тромбоцитов необходимы разные концентрации индукторов агрегации, следует приготовить богатую плазму с одинаковым числом тромбоцитов для всех образцов (исследуемых и контрольных). Для стандартизации числа тромбоцитов следует развести богатую тромбоцитами плазму бедной таким образом, чтобы число тромбоцитов стало равным 150-300 х 109.

Для записи агрегатограммы любому агрегометру необходимо определить оптическую плотность и ряд других параметров в исследуемых образцах, поэтому компьютерный алгоритм агрегометра будет требовать установить в измерительные гнезда пробирки с бедной и богатой тромбоцитами плазмами.

В кювету агрегометра вносят 0,3 мл богатой тромбоцитами плазмы (со стандартным числом тромбоцитов 150-300 х 109), инкубируют пробирку в гнезде для измерения в течение 60-120 с для нагрева богатой тромбоцитами плазмы до 37 °С, затем включают магнитную мешалку, добавляют 0,015 мл раствора индуктора агрегации. В момент добавления индуктора агрегации включают запись регистрации агрегации*.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Существует много способов оценки агрегатограмм, но наиболее информативно измерение степени агрегации и угла наклона, поскольку неплохую воспроизводимость демонстрируют именно эти показатели. Их нормальный диапазон зависит от большого числа причин (марки агрегометра, используемых реагентов, числа тромбоцитов, конечной концентрации индуктора, скорости вращения магнитной мешалки и многих других), поэтому общепринятых диапазонов нормы при измерении агрегационной функции тромбоцитов нет. Это вынуждает врачей-лаборантов уточнять нормативы самостоятельно.

Применение низких концентраций стимуляторов агрегации дает возможность оценить раздельно первую и вторую волны агрегации. Большую ценность имеет информация о наличии или отсутствии второй волны агрегации, поскольку именно вторая волна на агрегатограмме отражает реакцию высвобождения содержимого тромбоцитарных гранул (плотных и а-гранул).

Весьма полезно при записи агрегации тромбоцитов использовать несколько стимуляторов агрегации. При наличии геморрагического синдрома и отсутствии нарушений агрегации тромбоцитов необходимо повторно выполнить исследование через 1-1,5 месяца. И наоборот, при наличии специфичных изменений агрегации для болезни Бернара-Сулье, тромбастении Гланцманна и другой патологии необходимо повторно исследовать агрегационную функцию тромбоцитов.

Причины ошибок

Тест очень чувствителен к дефектам преаналитического этапа. Даже минимальный недостаток цитрата натрия вследствие низкого гематокрита ведет к значительным погрешностям и невоспроизводимым результатам.

Последовательность манипуляций и объемы смешиваемых реагентов могут отличаться для разных типов агрегометров.

  • воздействия ионизирующего излучения (радиации);
  • отравления свинцом и прочими веществами;
  • различных заболеваний системы крови;
  • от наличия у пациента коллагенозов;
  • развивающегося нефрита хронической формы.
  1. Исключить из рациона питания спиртные напитки, морскую капусту, соления и красный виноград.
  2. Включить в свой рацион свежую рыбу, болгарский перец, печень, гречку и яблоки.
  3. Иногда лечащий врач может назначить специальные лекарственные препараты для подъёма уровня тромбоцитов. Категорически не стоит заниматься самолечением!
  4. Не принимать лекарства, которые в качестве побочного эффекта могут вызвать тромбоцитопению.
  5. Употреблять витамины группы А, В и С.

Техника выполнения

В сухую пластиковую пробирку вносят 1,98 мл 1% оксалата аммония и 0,02 мл крови. Медленно и аккуратно перемешивают смесь в течение 2 мин, а затем ее инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее заполняют две камеры Горяева содержимым пробирки и на 10 мин помещают их в чашку Петри, в которой находится влажная марля или смоченный фильтр.

После этой инкубации, которая необходима для оседания тромбоцитов, подсчитывают их число в 25 квадратах. Среднюю арифметическую результатов подсчета в двух камерах умножают на 1000. При исследовании цитратной крови результат увеличивают на 10 % и умножают на 1000, что позволяет корректировать разведение венозной крови раствором натрия цитрата.

Что влияет на достоверность результатов?

Многие факторы причастны к повышению уровня тромбоцитов. Так, все инфекционные заболевания организма в острой форме приводят к увеличению количества данных кровяных клеток в крови. То же самое наблюдается и при наличии нарушений кроветворной системы и онкологических заболеваний.

Также количество тромбоцитов в крови часто меняется у людей, переживающих постоянные стрессовые ситуации. Помимо этого, некоторым покажется странным, что во время больших кровопотерь количество этих кровных клеток возрастает, но это говорит о том, что организм человека таким образом компенсирует потери крови.

Повышенная концентрация тромбоцитов также наблюдается у людей, долгое время употребляющих спиртные напитки.

При длительном и бесконтрольном приёме препаратов, оказывающих тромоцитопеническое действие, картина крови значительно изменится. Такое же происходит и при заболевании некоторых органов, к примеру, печени, щитовидной железы и др. Иногда порезы или кровотечения из носа могут негативно повлиять на количество тромбоцитов в крови, понижая их количество.

Выводы

Таким образом, исследование обладает высокой точностью. И если в результате оно показало отклонения от нормы, то в срочном порядке необходимо скорректировать этот показатель, дабы избежать опасных последствий.

Теперь понятно, что значит тромбоциты по Фонио.

Прочитайте:
  1. A. при наличии определенного количества однородных (по полезности или доходности) объектов недвижимости самым высоким спросом будут пользоваться объекты с наименьшей ценой
  2. B. активаци свёртывания крови вследствие снижения выработки гепарина
  3. C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией,
  4. C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией,
  5. C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией,
  6. D. Управление потоком крови с помощью аорты и промывание органов

Исследуемый образец.
Капиллярная кровь.

Принцип метода.
Тромбоциты подсчитываются в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза на 1000 эритроцитов с последующим пересчетом на 1 л крови.

Реактивы и оборудование.
Микроскоп. Пробирки (1х10 см), пипетки от аппарата Панченкова, 14% раствор сульфата магния или 6% водный раствор этилен-диаминотетраацетата натрия (ЭДТА), метиловый спирт.

Выполнение метода.
Капилляром Панченкова набирают раствор сульфата магния или ЭДТА до метки “75” и вносят в пробирку. Туда же вносят кровь, взятую из пальца аппаратом Панченкова до метки “0”. Содержимое тщательно перемешивают. Из смеси готовят тонкие мазки, фиксируют их метиловым спиртом 10 минут и окрашивают по Романовскому-Гимза. В каждом поле зрения микроскопа подсчитывают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Рисунок 10.
Тромбоциты периферической крови в окрашенном мазке.

Как считаются тромбоциты по методу Фонио

Оценка результатов.
Зная количество эритроцитов в 1 л, рассчитывают число тромбоцитов. Пределы колебаний количества тромбоцитов, определенного этим методом, и трактовка результатов совпадают с результатами фазово-контрастного микроскопирования.

Примечания.
Мазки окрашиваются 2 — 3часа, если используется сернокислая магнезия и 35 — 40 минут, если употребляется ЭДТА.

2.2.3. Подсчет тромбоцитов с использованием гематологических анализаторов.

· MPV — средний объем тромбоцитов —
данный показатель увеличивается с возрастом: с 8,6 — 8,9 фл у детей 1 — 5 лет до 9,5 — 10,6 фл у людей старше 70 лет. «Молодые» кровяные пластинки имеют больший объем, поэтому при ускорении тромбоцитопоэза средний объем тромбоцитов возрастает. Увеличение
показателя MPV наблюдается у больных с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой, тиреотоксикозом, сахарным диабетом, миелопролиферативными заболеваниями, атеросклерозом; а также у курильщиков и лиц, злоупотребляющих алкоголем. Снижение
наблюдается после спленэктомии, при синдроме Вискотта-Олдрича.

· PDV — распределение тромбоцитов по объему
— измеряется в процентах (коэффициент вариации тромбоцитометрической кривой) и количественно отражает гетерогенность популяции этих клеток по размерам (степень анизоцитоза тромбоцитов). В норме показатель составляет 1-20%. Результаты могут быть выражены в виде кривой — тромбоцитарной гистограммы.

Рисунок 11.
Тромбоцитарная гистограмма (а
) в норме; (б)
тромбоцитопения; (в
) гипертромбоцитоз, макротромбоцитоз.

· РСТ
— тромбокрит
— отражает долю объема цельной крови, занимаемую тромбоцитами. Он аналогичен гематокриту и выражается в процентах. В норме тромбокрит составляет 0,15 — 0,40%.

2.3. Морфологический анализ тромбоцитов (тромбоцитарная формула).

Принцип метода.
Для постановки диагноза тромбоцитопатии кроме подсчета количества тромбоцитов необходимо изучить их размеры, форму и структуру. Последняя наиболее хорошо выявляется после паноптической окраски тромбоцитов по Нохту (смесью азура и эозина).

Реактивы.
Абсолютный метиловый спирт, который получают добавлением в сосуд с продажным метиловым спиртом просушенного до постоянного веса химически чистого медного купороса. Сосуд герметически закупоривается. Перед употреблением готовят смесь красок из 10 частей раствора азура, 5 частей раствора эозина и 10 частей водопроводной воды. Азур II и эозин используются в разведении 1:1000.

Ход определения.
Мазки готовятся без стабилизатора (ЭДТА или сернокислой магнезии). Их фиксируют 15 минут в абсолютном метиловом спирте и красят 45 минут смесью красок.

Оценка результатов.
Если в мазке некоторые тромбоциты образуют скопления по 5-6 пластинок, считается, что это хорошая агрегация.

Тромбоциты здорового человека обычно округлые ли овальные. 90 — 92% из них являются нормотромбоцитами (их диаметр в 3 — 3,5 раза меньше диаметра эритроцитов здорового человека и составляет 1,5 — 3 мкм). 8 — 12% тромбоцитов относятся к микропластинкам (диаметр 1 — 1,5 мкм), макропластинкам (диаметр 3,5 — 5 мкм) и мегатромбоцитам (6 — 10 мкм) (рис.12
).

Структура тромбоцитов отражает степень их зрелости. Различают юные, зрелые и старые кровяные пластинки. Не всегда встречаются в крови здорового человека тромбоциты раздражения и дегенеративные пластинки.

Юные
формы тромбоцитов отличаются от зрелых несколько большей величиной (2 — 5 мкм), нерезкими контурами, выраженной базофилией гиаломера и нежной необильной азурофильной зернистостью.

Зрелые
формы — наиболее типичные — округлые или овальные, с ровными контурами, диаметром 2 — 4 мкм, в них четко разделяются грануломер с хорошо выраженной красно-фиолетовой зернистостью и голубовато-розовый (сиреневый) гиаломер.

Рисунок 12.
Семь малых, два больших и два мегатромбоцита в мазке периферической крови.

У старых
форм тромбоцитов насыщенно-фиолетовый грануломер на всю центральную часть кровяной пластинки и светло-розовый узкий гиаломер по периферии. Пластинки как бы сморщены, диаметр составляет 0,5 — 2,5 мкм.

Тромбоцитам раздражения
свойственны большой полиморфизм и значительная величина. Встречаются гигантские колбасовидные, хвостатые и т.п. пластинки диаметром 7 — 9 и даже

12 мкм (рис. 13 А, Б
).

Рисунок 13.
Гигантские аномальные тромбоциты в мазках периферической крови.

Дегенеративные
формы не содержат зернистости (гиалиновые, голубые пластинки) или имеют темно-фиолетовую зернистость в виде комков или мелких осколков (пылинок), встречаются и вакуолизированные пластинки.

Практическое значение.
Тромбоцитарная формула здоровых людей: юные 0 — 0,8%; зрелые 90 — 95%; старые 2 — 5,5%; дегенеративные — 0 — 0,2%; раздражения 0,8 — 2,5%; вакуолизированные — 0%.

Повышение числа юных форм (“омоложение” или сдвиг тромбоцитарной формулы влево) отмечается при повышении регенерации костного мозга (гемолитическом кризе, посттрансфузионных осложнениях, лейкозе, после кровопотери, спленэктомии и др.).

Большое число старых форм (“постарение” или сдвиг тромбоцитарной формулы вправо) чаще всего обнаруживается у больных раком. Формы раздражения присущи тромбоцитопеническим состояниям. Количество старых и дегенеративных форм увеличивается у больных наследственными и симптоматическими тромбастениями, циррозом печени, при отравлении бензолом.

При миелопролиферативных заболеваниях (хроническом миелолейкозе, тромбоцитемии, полицитемии и др.) в периферической крови наряду с формами раздражения встречаются “тромбобласты” — фрагменты ядер мегакариоцитов, которые окружены цитоплазмой с отшнуровывающимися пластинками.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Сердце
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: